用于高效细胞转染的多重微流控连续流电穿孔系统

细胞疗法有可能推进对多种疾病的治疗，但依赖于病毒进行基因重编程。生产病毒所需的时间和成本造成了瓶颈，限制了细胞疗法的开发和可及性。电穿孔是一种绕过这些瓶颈的基因重编程的非病毒替代方案，但目前的电穿孔技术存在通量低、优化繁琐且难以扩展到大规模细胞生产的问题。在这里，我们提出了一个适应性强的微流体电穿孔平台，该平台能够对 96 孔板进行快速、多路复用优化。一旦使用小体积细胞优化了参数，转染就可以无缝扩展到大批量细胞生产，而无需重新优化。我们...

通过电转染从大黄鱼 （Larimichthys crocea） 的肌肉细胞中诱导多能干细胞

诱导多能干细胞 （iPSC） 是一种新型多能细胞，从体细胞重新编程回干细胞的胚胎样多能状态，用于研究发育、疾病和潜在的基因疗法。鱼类中 iPSCs 的诱导和调节机制尚不清楚。通过使用转染技术，我们研究了 OSKMNL 因子共表达对大黄鱼 （Larimichthys crocea） （LYCMs） 肌肉细胞系体细胞重编程的关键功能，并成功建立了稳定的 iPSCs 系 （Lc-OSNL-iPSCs）。实现了具有高碱性磷酸酶活性和稳定核型的 ...

利用脉冲电场和自然资源增强 MCF-7 和 HeLa 细胞界面相互作用

电穿孔在化疗中发挥作用，提供了一种有前途的策略，可以提高抗癌药物的效力并改善某些类型恶性肿瘤的治疗结果。电穿孔是一种生物技术，其中将短电脉冲施加到细胞或组织上，暂时破坏它们的细胞膜。这种破坏会在细胞膜上产生临时孔或通道，从而引入膜，使 DNA、RNA、蛋白质、蛋白质或药物等外来物质进入细胞。该技术的有效性将有助于开发新的癌细胞疗法和伤口愈合方法。本综述讨论了电穿孔技术使用 100-100V/cm 的电脉冲对乳腺癌细胞 （MCF-7） 和...

利用 WAVE 生物反应器中的游离型稳定池快速、稳定地生产重组蛋白

蛋白质试剂是药物发现项目多个阶段的重要资源，从结构生物学和检测开发到先导化合物优化。根据项目的目标，需要不同量的纯蛋白质。在扩大蛋白质试剂供应之前，小规模表达最初用于确定可达到的生产和质量水平。通常，不同的实验需要几百毫克到几克的量，包括结构研究和活性评估，这需要相当大的培养量。这意味着需要培养大量瞬时转染细胞或稳定池/稳定细胞系。因此，可扩展的生产工艺可加快开发项目，并提高整个规模中蛋白质试剂质量的稳健性。在这里，我们展示了一种具有高...

Schlafen14以依赖密码子的方式损害HIV-1的表达

Schlafen （SLFN） 是一个被 I 型干扰素上调的蛋白质家族，在翻译中具有调节作用。有趣的是，SLFN14 与核糖体结合，可以在体外降解 rRNA、tRNA 和 mRNA，但在翻译中的作用仍然未知。核糖体是富含稀有密码子的 mRNA 翻译延伸过程中的重要调节枢纽。因此，我们以 HIV-1 基因为模型，评估了 SLFN14 在稀有密码子中富集的 mRNA 表达中的潜在作用。我们发现，在包括原代免疫细胞在内的多种细胞类型中，SLF...

使用响应面法将质粒 pGAPZαA – CecMd3cs 电转化优化为 Pichia pastoris GS115

背景：工业生产越来越依赖于各行业的重组微生物。因此，对于长期操作可行性，在优化操作关键生物体的准备工作时应注意这一点非常重要。在电转化中，低频电场脉冲会增加酵母细胞的活力，但会降低其重组 DNA 载体的跨膜。在此，我们研究了将 pGAPZαA-CecMd3cs 转化为 Pichia pastoris GS115 并获得目标重组细胞的高效生产的最佳参数。结果：在初始实验中，我们利用单因素实验设计进行电穿孔并一式三份测量矢量转换效率，确定了...

一种优化的培养系统，用于从植入前胚胎和重新编程体细胞中高效提取猪扩增的潜力干细胞

猪与人类具有相同的解剖和生理特征，可以作为转化医学的大型动物模型。真正的猪多能干细胞 （PSC） 可以促进细胞和药物治疗的测试。农业和生物技术可能受益于产生免疫细胞以研究动物传染病的能力，以及在干细胞中轻松编辑猪基因组的能力。在过去的几十年里，人们一直在密集尝试从植入前胚胎中分离猪 PSC。我们之前报道了从植入前胚胎和通过重编程多种哺乳动物物种（包括猪）的体细胞衍生出扩增的潜力干细胞 （EPSC）。猪 EPSC （pEPSC） 无限期自...

比较化学转染、电穿孔和慢病毒载体转导，以在 Vero 细胞系中实现最佳转染条件

背景：转染是研究细胞环境中基因表达的重要分析方法。在宿主细胞中进行高效 DNA 转染存在一些障碍，包括绕过质膜、逃避内体区室化、自噬、免疫感应途径和易位核膜。因此，引入最佳转染方法以在 Vero 细胞系中实现高转染效率将非常有用。本研究的目的是比较各种转染技术，并引入一种在 Vero 细胞中进行基因递送的高效方法。方法：在本研究中，使用了化学转染、电穿孔和慢病毒载体转导三种转染方法，以获得 Vero 细胞系中的最佳转染条件。在不同的实验...

钙离子对质粒DNA电传递效率及细胞活力的影响

基因电转移（GET）技术被认为是一种很有前途的基因治疗工具。这种疗法将应用于治疗各种遗传疾病，包括癌症。然而，尽管该技术具有广泛的适用性，但由于缺乏对电穿孔的基本机制以及其他直接或间接影响其成功率的重要因素的了解，该技术受到限制。在当前的研究中，我们使用流式细胞术分析了低浓度（0-1 mM） Ca2+对DNA电转移过程的影响。结果表明，当CaCl2浓度低至0.25 mM时，GET效率降低约1.5倍，细胞活力降低约2 - 3倍。此外，我们...

缓冲液组成和质粒毒性对利用纳秒和微秒脉冲在哺乳动物细胞中电穿孔非病毒基因传递的影响

基因电转移 （GET） 是一种非病毒基因递送技术，也称为电穿孔介导的基因递送或电转染。GET 是一种通过施加外部脉冲电场 （PEF） 在细胞膜上产生临时孔，将外来遗传物质（如 DNA 或 RNA）引入细胞的方法。本研究旨在检查缓冲液组成对哺乳动物细胞中 GET 效率的影响此外，我们专门比较了高频纳秒 （ns） 脉冲与标准微秒 （μs） 脉冲的有效性。为了评估细胞转染效率和活力，进行了流式细胞术分析、发光测定和代谢活性测量。使用两种编码质...

公司首次亮相2024年中国生命科学大会

合肥市高新区领导来公司调研

6月8日上午9：00，合肥市高新区领导，带领各职能科室人员，来到我公司现场走访，就我公司目前的发展规划及新项目新产品相关事宜进行了调研。由公司董事长、总经理、技术负责人等人员接待此次的视察工作。会议中，董事长金腾川向区领导详细介绍公司的发展战略，及关于企业在创新科技中面临的困难和团队成员的介绍，区领导表示在政策允许的范围内，会大力支持公司的创新科技研发。技术负责人李清宁向视察领导详细介绍了微流控系统和PCR系统的技术进展和相关配套规划及...