神经病变相关 Tecpr2 突变敲入小鼠揭示神经元和小胶质细胞中内溶酶体功能丧失表型

编码 Tectonic β-propeller repeat-containing repeat protein 2 （TECPR2） 的基因突变会导致遗传性感觉和自主神经病变亚型 9 （HSAN9），这是一种涉及感觉和周围神经系统的致命神经发育和神经退行性疾病。TECPR2 普遍表达并与细胞内的运输和分选有关，然而，其功能作用仍然不明确。此外，缺乏对 HSAN9 潜在致病机制的分子见解。在这里，我们报告了一种新型小鼠模型，该模型携带导...

乳腺癌细胞在体外和 I-SPY 试验中对抗有丝分裂剂的 CHFR 表达和敏感性

CHFR 编码一种 E3 泛素连接酶，以前与调节有丝分裂前检查点和对紫杉烷的反应有关，在乳腺癌的子集中被沉默。在这里，我们评估了 CHFR 表达差异对体外对各种抗有丝分裂剂敏感性以及临床环境中对新辅助紫杉烷治疗反应的影响。人乳腺癌细胞系中的集落形成测定和活细胞成像表明，CHFR 下调与体外对 PLK1 抑制剂和紫杉醇的敏感性增加有关，这反映了有丝分裂过早退出和多核形成增加。为了评估 CHFR 表达与新辅助紫杉烷反应之间的关系，我们利用免...

在生理温度下通过RNase抑制剂混合物在活体人细胞中延长寿命的化学未修饰RNA的细胞内核磁共振谱

拥挤的细胞内环境会影响RNA结构和相互作用。虽然细胞内核磁共振 （NMR） 波谱可以对活体人体细胞中的 RNA 进行原子分辨率研究，但由于 RNA 快速降解，其应用受到限制。在这项研究中，我们将 RNase 抑制剂混合物引入活体人体细胞中，并获得了与 HIV-1 Tat 强结合的 RNA 适体的细胞内 NMR 光谱，无论是否含有源自 Tat 的肽。引入RNase抑制剂混合物有效抑制了RNA降解。显着延长的寿命使得在生理温度下能够观察活体...

Piezo1调节软基质粘弹性的机械转导

机械敏感离子通道（如 Piezo1）在感知细胞外基质的机械特性方面发挥着重要作用。然而，Piezo1是否以及如何感知与时间相关的基质机械性能，即粘弹性，仍然未知。为了解决这个问题，我们将永生化间充质干细胞系（其中 Piezo1 表达可以沉默）与具有独立可调弹性和粘性模量的柔软和坚硬的粘弹性水凝胶相结合。我们通过实验和通过将 Piezo1 纳入改进的粘弹性分子离合器模型的模拟证明了 Piezo1 是软基质中粘弹性机械转导的调节剂。使用RN...

nrdAB 的长 5' UTR 调节铜绿假单胞菌 PAO1 的 mRNA 水平、稳定性和毒力

由铜绿假单胞菌中 nrdAB纵子编码的 Ia 类核糖核苷酸还原酶 （RNR） 具有长 5' 非翻译区 （5' UTR），其调节作用仍知之甚少。在这项研究中，我们使用一套全面的生物信息学和实验方法研究了 nrdAB 5' UTR 的功能意义，包括基因表达谱、相对蛋白质水平和 Galleria mellonella 动物模型中的体内感染测定。我们的结果表明，5' UTR 通过降低转录水平、降低 mRNA 稳定性和限制蛋白质丰度来负调控 nr...

促进驹形菌碱化转录反应的信号通路：转录因子 Crz1 和 Rim101 的作用

启动子能够对工业相关酵母 Komagataella phaffii 的适度碱化做出反应，已被提议作为设计用于异源蛋白质表达的新型无甲醇平台的工具。然而，这种反应的分子碱基尚不清楚。我们在这里鉴定了 K. phaffii 中的转录因子 Crz1 和 Rim101，并使用 CRISPR/Cas9 技术创建单突变和双突变菌株。虽然 crz1 细胞对 Ca 非常敏感2+离子，对碱性pH值轻度敏感，对SDS过耐受，rim101细胞对Na和Li离子...

代谢相互作用驱动交叉摄养微生物群落中的种群周期

种群周期在生态系统中普遍存在，并在决定其功能方面发挥着关键作用。虽然理论上已经证明有多种机制可以产生种群周期，但推动自我维持振荡的互惠共生的例子有限。使用交叉喂养必需氨基酸的工程微生物群落，我们通过实验证明了菌株丰度的循环在各种环境条件下都很稳健。结合实验观察到的氨基酸产生交叉抑制的非线性动力学模型概括了种群周期。该模型表明，这些循环代表了内部产生的弛豫振荡，当具有正反馈的快速资源动力学驱动应变丰度的缓慢变化时，就会出现松弛振荡。资源动...

CurT/CURT1蛋白参与蓝藻和绿藻的细胞和叶绿体分裂协调

CURVATURE 类囊体 1 （CURT1） 家族的植物蛋白及其原核 CurT 同源物是叶绿体和蓝藻中类囊体膜系统三维结构的关键决定因素。由于 CURT1/CurT 家族的进化起源似乎与类囊体本身的进化一致，因此塑造类囊体系统已被广泛认为是它们的主要作用。在这项研究中，我们提供了强有力的证据，表明 CurT 除了调节类囊体结构之外，还参与了聚囊藻属 PCC 6803 和 Synechococcus elongatus PCC 7942...

选择氨酰基-tRNA 合成酶/tRNA 对，将非经典氨基酸高效遗传编码为蛋白质

遗传密码扩展应用的一个关键组成部分是氨酰基-tRNA 合成酶 （RS）/tRNA 对，它忠实地编码响应特定密码子的非经典氨基酸 （ncAA）。在这里，我们详细介绍了从公开可用的 320 万成员甲甲基嗜碱碱 alvus pyrrolysyl-RS （马PylRS） 活性位点突变体库中选择 ncAA 特异性 RS 的程序。该过程的四个主要部分是：（1）准备文库以供使用并创建所需的细胞系;（2）分别选择功能性RS和选择包含经典氨基酸的RS的生...

使用病毒编码的基于CRISPR的直接读出系统（VECOS）对宿主-病毒相互作用进行多维分析

CRISPR-Cas9 技术改变了基因功能的研究，能够系统地研究宿主-病毒相互作用。然而，在病毒感染的背景下，大多数基于 CRISPR 的筛选都依赖于细胞存活作为读数，这限制了它们的敏感性并使结果偏向于早期感染阶段。为了应对这些挑战，我们开发了病毒编码的基于CRISPR的直接读出系统（VECOS），这是一种以病毒为中心的方法，其中人类巨细胞病毒被改造为直接从其基因组表达单引导RNA（sgRNA）文库。该系统允许嵌入病毒基因组中的 sgR...

SPP1 是维持胰腺癌间充质细胞命运所必需的

阐明肿瘤细胞之间复杂的通讯网络对于理解胰腺导管腺癌 （PDAC） 的细胞命运决策和进展至关重要 1,2.我们之前表明，间充质PDAC细胞分泌的BMP拮抗剂GREM1对BMP活性的持续抑制对于维持上皮PDAC细胞的命运至关重要3.在这里，我们确定 SPP1（也称为骨桥蛋白）4作为胰腺癌间充质细胞命运的关键调节因子。PDAC 患者血浆的蛋白质组学分析表明，SPP1 在晚期疾病中显着上调。Spp1 失活导致小鼠 PDAC 模型的肿瘤发生延迟并...

系统发现CRISPR增强的CAR T细胞免疫疗法

嵌合抗原受体（CAR）T细胞疗法在治疗血癌方面取得了显著的成功，但CAR T细胞功能障碍仍然是治疗失败的常见原因1.在这里，我们介绍 CELLFIE，这是一个 CRISPR 筛选平台，用于增强跨多个临床目标的 CAR T 细胞。我们在人原代 CAR T 细胞中进行了全基因组筛选，读数捕获了 T 细胞生物学的关键方面，包括增殖、靶细胞识别、激活、细胞凋亡和自相残杀以及耗尽。使用新的体内 CROP-seq 对筛选命中进行优先级排序2在人类白...