用于脑肿瘤建模的人胎儿脑类器官的生成及其 CRISPR 工程

发育中的人脑显示出难以在动物模型中研究的独特特征。目前基于人脑组织的体外模型面临一些挑战，包括二维或三维神经干细胞培养物的细胞异质性有限，而组织切片培养物的生存期短。我们最近建立了培养条件，通过保持组织完整性直接从人类胎儿脑组织获得类器官培养物，组织完整性可以长期扩增并显示出细胞异质性和复杂的组织。在本协议中，我们描述了建立广泛保留区域特征的人胎脑类器官 （FeBOs） 的详细程序，以及它们的传代和表征程序。此外，我们描述了应用于 FeBO 的基因组工程方法，以生成突变的 FeBO 系，这些细胞系可用作通用的自下而上的脑癌模型。最后，我们举例说明了适用于健康和突变 FeBO 的各种下游应用。具有组织培养经验的科学家预计建立人类 FeBO 培养物需要 2-3 周，而 FeBO 的基因组工程需要 2-4 个月。