E2-Ub-R74G 策略揭示了活细胞中 E2 特异性泛素偶联曲线

E2 泛素 （Ub） 偶联酶主要确定 Ub 偶联为 Ub-异肽（赖氨酸）、Ub-氧酯（丝氨酸/苏氨酸）或 Ub-硫酯（半胱氨酸）。然而，细胞内的 E2 特异性 Ub 偶联曲线仍然难以捉摸。在这里，我们开发了融合 E2-Ub-R74G 分析 （FUSEP） 策略，以访问具有氨基酸分辨率的细胞中的 E2 特异性 Ub 偶联曲线。探针特异性亮氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸修饰的 Ub 残余物能够对非赖氨酸 Ub 偶联进行系统研究，并提供位点特异性信息。发现多种 E2 酶参与非赖氨酸泛素化。使用 UBE2D3-Ub-R74G 探针进行分析，在人 Cullin-1（Cullin-RING E3 Ub 连接酶的支架蛋白）中鉴定出翻译后修饰，酪氨酸泛素化。这种修饰与赖氨酸泛素化不同。经鉴定出单通道膜结合 E3 连接酶 RNF149 与 UBE2D3 配对，通过泛素化细胞凋亡相关斑点样蛋白 ASC 来调节焦亡。该工具箱的推出为揭示 E2 特异性 Ub 偶联谱和识别以前未知的 E3 Ub 连接酶以用于潜在的治疗应用铺平了道路。