使用 TYPE IE CRISPR-Cas3 在小鼠和大鼠受精卵中进行基因组编辑

I 型 CRISPR 系统最近成为一种很有前途的工具，尤其是对于大规模基因组修饰，但它通过编辑受精卵生成模型动物的应用尚未建立。在这项研究中，我们展示了使用 TYPE I-E CRISPR-Cas3 系统在受精卵中进行基因组编辑，该系统以 40%-70% 的编辑效率在小鼠的靶向基因座上有效地生成数千个碱基对的缺失，而没有脱靶突变。为了克服与检测变量缺失相关的困难，我们使用了一种新的基于长读长测序的多重基因分型方法。我们基于 Cas3 的技术展示了非凡的多功能性，甚至通过受精卵电穿孔方法成功地扩展到大鼠和小鼠。在小鼠中还实现了 SNP 交换的敲入和用供体质粒的基因组替换。这项使用 I 型 CRISPR 受精卵编辑系统的开创性工作为不同物种的基因工程提供了更高的灵活性和更广泛的应用。