通过随机整合产生的重组中国仓鼠卵巢细胞中抗体产生的环境依赖性基因组基因座效应

使用中国仓鼠卵巢 （CHO） 细胞高产生产治疗性蛋白质 需要稳定的细胞系开发 （CLD）。CLD 通常使用转基因的随机整合;然而，这会导致克隆变异和随后费力的克隆筛选。因此，蛋白质表达盒与表现出高转录活性和稳定性的所需染色体位点的位点特异性整合（称为热点）正在出现。尽管位置效应对于治疗性蛋白质表达很重要，但热点起作用的序列特异性机制尚不清楚。在这项研究中，我们进行了全基因组测序 （WGS），以定位表达高水平单克隆抗体 （mAb） 的重组 CHO 细胞基因组中随机插入的载体，并实验验证了这些位置和载体组成。整合位点的特征是活性组蛋白标记和潜在的增强子活性，并且在整合位点上游区域聚集的规则间隔短回文重复序列 （CRISPR）/CRISPR 相关蛋白 9 （Cas9） 介导的插入缺失突变导致特异性抗体生产率显著降低高达 30%。值得注意的是，整合位点及其核心区域在天然基因组环境之外没有等效的功能，对宿主细胞系中外源蛋白表达的增加影响最小。我们还观察到，与宿主细胞系相比，表达 mAb 的细胞系具有更高的生产能力。总的来说，本研究证明，开发重组 CHO 细胞系以产生高水平的治疗性蛋白质需要平衡多种因素，包括转基因配置、基因组位点景观和宿主细胞特性。