使用响应面法将质粒 pGAPZαA – CecMd3cs 电转化优化为 Pichia pastoris GS115

背景：工业生产越来越依赖于各行业的重组微生物。因此，对于长期操作可行性，在优化操作关键生物体的准备工作时应注意这一点非常重要。在电转化中，低频电场脉冲会增加酵母细胞的活力，但会降低其重组 DNA 载体的跨膜。在此，我们研究了将 pGAPZαA-CecMd3cs 转化为 Pichia pastoris GS115 并获得目标重组细胞的高效生产的最佳参数。 

结果：在初始实验中，我们利用单因素实验设计进行电穿孔并一式三份测量矢量转换效率，确定了五个电压中的三个 （250-350 V）、脉冲持续时间 （9-17 ms） 和脉冲频率 （1-5 个脉冲） 作为进一步分析的候选值。基于这些数据，我们利用响应面方法统计建模的 Box-Behnken 获得了每个参数的最佳值 。我们发现，在固定电压下，影响电转化效率的主要因素是脉冲持续时间和频率。此外，我们确定了脉冲长度和电压之间以及脉冲长度和频率之间的协同相互作用。 

结论：电穿孔的最佳参数是 275 V 和 3 个持续时间为 15 ms 的脉冲。我们用生物信息学确定了最佳转化参数。