通常建议在死前进行固定剂经心灌注,用于高质量的脑组织学准备,确保快速且深入地渗透组织,以保护最脆弱的脑结构。尽管该手术在麻醉和适当的镇痛下进行,但对实验者来说仍然繁琐,并引发伦理问题。最近,基于先行动物安乐死后向循环注射固定剂的替代方案被提出。这些所谓的死后灌注方案理论上应确保组织固定质量相当,同时不使活体动物接受手术。在采用这一新方法之前,有必要验证样本质量是否等同,确保科学结果的有效性。我们对多种通过死前或死后经心腔灌注固定组织的方案进行了平行比较,并测量了其对轴突结构、树突棘和线粒体形态维持的影响。结果显示,组织学参数对灌注条件和所用固定剂的敏感性各异。例如,死后经心灌注组观察到轴突断裂和线粒体形态改变。我们还发现固定状态对免疫染色有可变影响,影响检测到的表达水平或模式。我们的结果为实验者选择最佳组织固定条件提供了指导,既能最大限度地减少动物的痛苦,又保证生物学结果的完整性。
原标题:Comparative study of pre- and post-mortem perfusion of fixative for the quality of neuronal tissue preparation
通讯作者:Olivier Raineteau & Julien Courchet
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