用于癌症免疫治疗的CRISPR编辑的原代小鼠CAR T细胞的制造

使用 CRISPR-Cas9 编辑嵌合抗原受体 （CAR） T 细胞已成为改善其抗肿瘤功能或安全性的常规策略。免疫缺陷小鼠的异种移植肿瘤模型通常用于评估CRISPR编辑的人CAR T细胞的功能。然而，这些模型缺乏功能性免疫系统，因此无法概括障碍，例如 CAR T 细胞在患者中会遇到的免疫抑制肿瘤微环境 （TME）。因此，对小鼠CAR T细胞进行基因改造以用于免疫完整模型是一种有吸引力的方法，可以探索给定基因缺失对天然TME内CAR T细胞的影响。在这里，我们描述了一种在原代小鼠T细胞中进行CRISPR-Cas9编辑的方案，从而能够在TME内和功能性免疫系统存在的情况下研究基因编辑的CAR T。该协议集成到标准小鼠 CAR T 制造工作流程中，该过程通常持续 ~5-6 天。该协议的第一阶段涉及分离小鼠T细胞，用核糖核蛋白复合物电穿孔它们，并通过使用磁珠刺激激活它们。第二阶段涉及转导 CAR 基因并扩增这些细胞，第三阶段侧重于验证基因编辑的小鼠 CAR T 细胞的敲除效率和功能。该过程需要熟练掌握无菌细胞培养技术并对 T 细胞生物学有基本的了解。我们预计，高效可靠的小鼠T细胞基因改造将在癌症免疫治疗和相关领域具有广泛的应用。

原标题：Manufacturing of CRISPR-edited primary mouse CAR T cells for cancer immunotherapy

通讯作者：Gregory L. Beatty & Marco Ruella

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